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己烯雌酚類的殘留檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

廣 州 健 侖 生 物 科 技 有 限 公 司

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己烯雌酚類的殘留檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

 1 原理及用途

己烯雌酚是甾類同化激素，被大量用于促進(jìn)反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)。但由于己烯雌酚存在明顯的致癌性，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家已相繼禁止或嚴(yán)格禁止使用。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件中規(guī)定，動(dòng)物源性食品中己烯雌酚的殘留*為不得檢出。

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)組織樣本中的己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的己烯雌酚和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗己烯雌酚抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)  

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～30min～15min

2.3 檢測(cè)下限：

組織（蝦、魚(yú)）………………………0.2ppb

豬肉/肝、雞肉/肝……………………0.5ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

己烯雌酚………………………………100%

雙烯雌酚………………………………38.5%

己烷雌酚………………………………8.5%

己炔雌二醇……………………………<0.1%

雌三醇…………………………………<0.1%

 2.5 樣本回收率：

組     織   ……………………… 85%±10%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)品：各1ml

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液：100ppb…………………1ml

酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………11ml

抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說(shuō)明書(shū)………………………………1份

5.3.1 組織（雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚(yú))樣本處理方法 

1）稱取2±0.05g勻漿后的樣本，加入6ml乙腈-丙酮混合液，振蕩2min，15℃4000r/min離心10min；

2）取3ml上清液，60℃氮?dú)?空氣吹干；

3）加入0.5ml（三氯甲烷），振蕩20s，加入2ml 2M NaOH，振蕩30s，4000r/min離心5min；

4）取上清液1ml，加入200µl 6M H₃PO₄，振蕩5s；

5）加入3ml乙腈萃取，振蕩2min，室溫4000r/min離心10min，取1.5ml上層有機(jī)相，60℃氮?dú)?空氣吹干；

6）不同樣本按如下方法復(fù)溶：

A）蝦魚(yú)：用1ml 40%甲醇溶液溶解干燥的殘留物，振蕩混勻30s。取50ul用于檢測(cè)。

    樣本稀釋倍數(shù)：4   檢測(cè)下限：0.2ppb

B）豬肉/肝、雞肉/肝：用2.5ml 40%甲醇溶液溶解干燥的殘留物，振蕩混勻30s。取50ul用于檢測(cè)。

    樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測(cè)下限：0.5ppb

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

8 注意事項(xiàng)

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

8.3 混合要均勻，洗板要*，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性。

8.4 在所有孵育過(guò)程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

9 貯藏及保存期

儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。

保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

  本公司的服務(wù)宗旨是“為民健康、誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)”。期望本公司能竭誠(chéng)為你服務(wù)
市場(chǎng)業(yè)務(wù)遍布全國(guó)各地，公司始終堅(jiān)持不懈地跟蹤*科研方向，掌控*國(guó)際前沿科學(xué)新技術(shù)，不斷進(jìn)取，為廣大客戶提供、較快的服務(wù)和優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品而不懈努力。

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