疾控預防中心診斷霍亂孤菌的試劑盒

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疾控預防中心診斷霍亂孤菌的試劑盒

  什么是霍亂？

  霍亂是因攝入的食物或水受到霍亂弧菌污染而引起的一種急性腹瀉性傳染病。每年，估計有300萬～500萬霍亂病例，另有10萬～12萬人死亡。病發(fā)高峰期在夏季，能在數(shù)小時內造成腹瀉脫水甚至死亡。

霍亂是由霍亂弧菌所引起的。O1和O139這兩種霍亂弧菌的血清型能夠引起疾病暴發(fā)。大多數(shù)的疾病暴發(fā)由O1型霍亂弧菌引起，而1992年*在孟加拉國確定的O139型僅限于東南亞一帶。非O1非O139霍亂弧菌可引起輕度腹瀉，但不會造成疾病流行。近，在亞洲和非洲的一些地區(qū)發(fā)現(xiàn)了新的變異菌株。據(jù)觀察認為，這些菌株可引起更為嚴重的霍亂疾病，死亡率更高。

霍亂弧菌存在于水中，較常見的感染原因是食用被患者糞便污染過的水?；魜y弧菌能產(chǎn)生霍亂毒素，造成分泌性腹瀉，即使不再進食也會不斷腹瀉，洗米水狀的糞便是霍亂的特征。

病因

霍亂是由霍亂弧菌所引起的?；魜y弧菌為革蘭染色陰性，對干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感?；魜y弧菌產(chǎn)生致病性的是內毒素及外毒素。正常胃酸可殺死弧菌，當胃酸暫時低下時或入侵病毒菌數(shù)量增多時，未被胃酸殺死的弧菌進入小腸，在堿性腸液內迅速繁殖，并產(chǎn)生大量強烈的外毒素。這種外毒素具有ADP-核糖轉移酶活性，進入細胞催化胞內的NAD+的ADP核糖基共價結合亞基上后，會使這種亞基不能將自身結合的GTP水解為GDP，從而使這種亞基處于持續(xù)活化狀態(tài)，不斷激活腺苷酸環(huán)化酶，致使小腸上皮細胞中的cAMP水平增高，導致細胞大量鈉離子和水持續(xù)外流。這種外毒素對小腸黏膜的作用引起腸液的大量分泌，其分泌量很大，超過腸管再吸收的能力，在臨床上出現(xiàn)劇烈瀉吐，嚴重脫水，致使血漿容量明顯減少，體內鹽分缺乏，血液濃縮，出現(xiàn)周圍循環(huán)衰竭。由于劇烈瀉吐，電解質丟失、缺鉀缺鈉、肌肉痙攣、酸中毒等甚至發(fā)生休克及急性腎衰竭。

臨床表現(xiàn)

瀉吐期

瀉吐期多以突然腹瀉開始，繼而嘔吐。一般無明顯腹痛，無里急后重感。每日大便數(shù)次甚至難以計數(shù)，量多，每天2000～4000ml，嚴重者8000ml以上。初為黃水樣，不久轉為米泔水水樣便，少數(shù)患者有血性水樣便或柏油樣便，腹瀉后出現(xiàn)噴射性和邊疆性嘔吐，初為胃內容物，繼而水樣，米泔樣。嘔吐多不伴有惡心，噴射樣，其內容物與大便性狀相似。少部分的患者腹瀉時不伴有嘔吐。由于嚴重瀉吐引起體液與電解質的大量丟失，出現(xiàn)循環(huán)衰竭，表現(xiàn)為血壓下降、脈搏微弱、血紅蛋白及血漿比重顯著增高，尿量減少甚至無尿。機體內有機酸及氮素產(chǎn)物排泄受障礙，患者往往出現(xiàn)酸中毒及尿毒癥的初期癥狀。血液中鈉鉀等電解質大量丟失，患者出現(xiàn)全身性電解質紊亂。缺鈉可引起肌肉痙攣，特別以腓腸肌和腹直肌為較常見。缺鉀可引起低鉀綜合征，如全身肌肉張力減退、肌腱反射消失、鼓腸、心動過速、心律不齊等。由于碳酸氫根離子的大量丟失，可出現(xiàn)代謝性酸中毒，嚴重者神志不清，血壓下降。

脫水虛脫期

脫水虛脫期患者的外觀表現(xiàn)非常明顯，嚴重者眼窩深陷，聲音嘶啞，皮膚干燥皺縮、彈性消失，腹下陷呈舟狀，唇舌干燥、口渴欲飲，四肢冰涼、體溫常降至正常以下，肌肉痙攣或抽搐。

恢復期

少數(shù)患者（以兒童多見）此時可出現(xiàn)發(fā)熱性反應，體溫升高至38℃～39℃，一般持續(xù)1～3天后自行消退，故此期又稱為反應期。病程平均3～7天。

檢查

血液檢查

紅細胞計數(shù)和血紅蛋白增高，白細胞計數(shù)增高，中性粒細胞及大單核細胞計數(shù)增多。血清鉀、鈉、氯化物和碳酸鹽降低，血pH下降，尿素氮增加。治療前由于細胞內鉀離子外移，血清鉀可在正常范圍內，當酸中毒糾正后，鉀離子移入細胞內而出現(xiàn)低鉀血癥。

尿檢查

少數(shù)患者尿中可有蛋白，紅、白細胞及管型。

病原菌檢查

常規(guī)鏡檢可見黏液和少許紅、白細胞。

涂片染色取糞便或早期培養(yǎng)物涂片作革蘭染色鏡檢，可見革蘭陰性稍彎曲的弧菌。

懸滴檢查將新鮮糞便作懸滴或暗視野顯微鏡檢，可見運動活潑呈穿梭狀的弧菌。

制動試驗取急性期患者的水樣糞便或堿性胨水增菌培養(yǎng)6小時左右的表層生長物，先作暗視野顯微鏡檢，觀察動力。如有穿梭樣運動物時，則加入O1群多價血清一滴，若是O1群霍亂弧菌，由于抗原抗體作用，則凝集成塊，弧菌運動即停止。如加O1群血清后，不能制止運動，應再用O139血清重作試驗。

增菌培養(yǎng)所有懷疑霍亂患者的糞便，除作顯微鏡檢外，均應作增菌培養(yǎng)。糞便留取應在使用抗菌藥物之前，且應盡快送到實驗室作培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基一般用pH8.4的堿性蛋白胨水，36℃～37℃培養(yǎng)6～8小時后表面能形成菌膜。此時應進一步作分離培養(yǎng)，并進行動力觀察和制動試驗。

分離培養(yǎng)常用慶大霉素瓊脂平皿或堿性瓊脂平板。前者為強選擇性培養(yǎng)基，36℃～37℃培養(yǎng)8～10小時霍亂弧菌即可長成小菌落。后者則需培養(yǎng)10～20小時。選擇可疑或典型菌落，應用霍亂弧菌“O”抗原的抗血清作玻片凝集試驗，若陽性即可出報告。近年來國外亦有應用霍亂毒素基因的DNA探針，作菌落雜交，可迅速鑒定出產(chǎn)毒O1群霍亂弧菌。

PCR檢測新近國外應用PCR技術來快速診斷霍亂。其中通過識別PCR產(chǎn)物中的霍亂弧菌毒素基因亞單位CtxA和毒素協(xié)同菌毛基因（TcpA）來區(qū)別霍亂菌株和非霍亂弧菌，然后根據(jù)TcpA基因的不同DNA序列來區(qū)別古典生物型和埃爾托生物型霍亂弧菌。4小時內可獲結果。

鑒別試驗古典生物型、埃爾托生物型和O139型霍亂弧菌的鑒別。

血清學檢查

可作血清凝集試驗。在發(fā)病第1～3日及第10～15日各取1份血清，若第2份血清的抗體效價比第1份增高4倍或4倍以上，有診斷參考價值。

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